SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
产品简介
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒规格：可制40-60块凝胶
保存: 10% SDS和TEMED (避光) 室温保存。30%丙烯酰胺混合液、1.5mol/L
Tris(pH8.8)、1.0mol/L Tris(pH6.8)4°C保存、过硫酸铵配制成10%溶液后，分装成小管-20°C保存，通常半年内有效。
本公司生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(SDS-PAGE Gel Parparation Kit)提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶了。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。
本试剂盒可配制不同常规、不同聚合度的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶) 约40-60块。
包装清单
| |
|
| 30%丙烯酰胺混合液 |
100ml |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
100ml
|
|
1.0mol/L Tris(pH6.8)
|
30ml |
|
10%过硫酸铵
|
5ml
|
|
10% SDS
|
5ml
|
|
TEMED
|
0.5ml
|
|
说明书
|
一份
|
保存条件
保存: 10% SDS和TEMED (避光) 室温保存。30%丙烯酰胺混合液、1.5mol/L
Tris(pH8.8)、1.0mol/L Tris(pH6.8)4°C保存、过硫酸铵配制成10%溶液后，分装成小管-20°C保存，通常半年内有效。
使用说明：
1. 10%过硫酸铵为5ml，应分装置-20°C保存，通常半年内有效。
2. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。
SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
|
SDS-PAGE分离胶浓度
|
最佳分离范围
|
|
6%胶
|
57-212kD
|
|
8%胶
|
36-94kD
|
|
10%胶
|
20-80kD
|
|
12%胶
|
12-60kD
|
|
15%胶
|
10-43kD
|
配制6%的PAGE分离胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸馏水
|
2.6
|
5.3
|
7.9
|
10.6
|
13.2
|
15.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.0
|
2.0
|
3.0
|
4.0
|
5
|
6.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.004
|
0.008
|
0.012
|
0.016
|
0.02
|
0.024
|
配制8%的PAGE分离胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸馏水
|
2.3
|
4.6
|
6.9
|
9.3
|
11.5
|
13.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.3
|
2.7
|
4.0
|
5.3
|
6.7
|
8.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
0.015
|
0.018
|
配制10%的PAGE分离胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸馏水
|
1.9
|
4.0
|
5.9
|
7.9
|
9.9
|
11.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.7
|
3.3
|
5.0
|
6.7
|
8.3
|
10.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.01
|
0.012
|
配制12%的PAGE分离胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸馏水
|
1.6
|
3.3
|
4.9
|
6.6
|
8.2
|
9.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
2.0
|
4.0
|
6.0
|
8.0
|
10.0
|
12.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.01
|
0.012
|
配制15%的PAGE分离胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸馏水
|
1.1
|
2.3
|
3.4
|
4.6
|
5.7
|
6.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
2.5
|
5.0
|
7.5
|
10.0
|
12.5
|
15.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%过硫酸铵
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.001
|
0.012
|
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称上层胶、积层胶或堆积胶)
配制不同体积的浓缩胶
|
成分
|
所需各成分的体积(毫升)
|
|
凝胶体积
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
8
|
|
蒸馏水
|
1.4
|
2.1
|
2.7
|
3.4
|
4.1
|
5.5
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
0.33
|
0.5
|
0.67
|
0.83
|
1.0
|
1.3
|
|
1.0mol/L Tris(pH6.8)
|
0.25
|
0.38
|
0.5
|
0.63
|
0.75
|
1.0
|
|
10%SDS
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.05
|
0.06
|
0.08
|
|
10%过硫酸铵
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.05
|
0.06
|
0.08
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.003
|
0.004
|
0.005
|
0.006
|
0.008
|
注意事项
10%过硫酸铵的水溶液不稳定,每次取用后应立即放回冰箱，尽量减少室温存放时间，以防失效。如发现凝胶聚合不好，应考虑丢弃使用过的10%过硫酸铵，更换新配制的10%过硫酸铵。
另外PAGE凝聚的速度和温度及催化剂的用量关系密切，在其它条件不变的情况下，可通过改变TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。操作中，特别是液体的混匀应尽量避免气泡的产生。
未聚合的丙烯酰胺有毒，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
