技术介绍

       CRISPR/Cas9 是一种基于细菌天然免疫机制开发出来的基因编辑技术，用于抵御病毒等外来物入侵的一种防御机制。经改造的CRISPR系统主要由Cas9蛋白和单链向导RNA（sgRNA）组成，其中sgRNA对靶序列进行特异性识别，Cas9蛋白负责对识别的靶序列进行切割，从而实现DNA的双链断裂。

KO 细胞系的应用

基因功能研究      

      由于模式生物基因组测序系统的逐渐完善，使CRISPR/Cas9技术在基因组中同时进行多靶位点的编辑成为可能。研究表明将缺失突变引入不同基因的编码外显子中，可以在人细胞中当做强大的阴性和阳性筛选对照。与先前的 RNAi 技术的脱靶严重、编辑效率低及仅限于转录过程相比，CRISPR/Cas9技术介导的筛选可更好的实现专一性和敏感性，设计的sgRNA可以靶向任何 DNA 序列。RNAi 方法只导致基因表达抑制，而CRISPR/Cas9技术产生的Indels可以致使基因功能丧失，比RNAi 出现更加明显的表型，这更容易鉴定目的基因。

药物靶点的确定      

      利用CRISPR-Cas9技术建立基因缺失病变的KO细胞模型，有助于研究疾病的发病机制和筛选潜在的药物靶点，并通过高通量药物反应数据，初步筛选出在特定药物处理下细胞存活率变化显著的细胞系，进而评估药物对特定基因敲除细胞的影响，从而筛选出有效的药物候选物。从基因的功能研究到药物靶点的筛选，再到药物效果的评估及验证，KO细胞系提供了一个强有力的实验平台，加速了新药的研发进程。同时，KO细胞系不仅在细胞层面上有所应用，还可以用于构建动物模型，进一步研究药物在体内的作用机制和治疗效果，尤其是在遗传性疾病的治疗研究中发挥着巨大作用。

抗体的特异性鉴定      

      抗体是生命科学研究中的常用试剂之一，抗体的特异性对研究者们至关重要。抗体的特异性是指抗体能够识别并结合到其目标抗原的能力，而不与其他非目标分子发生交叉反应。特异性抗体可以减少实验中的误差，降低了非目标分子的干扰，有助于提高实验的可重复性，使实验结果更加可靠。      

      目前，基因敲除验证（KO）是广受信任且接受度最为广泛的抗体特异性验证方法之一。利用CRISPR-Cas9技术，构建目的基因缺失的KO细胞系。如果抗体是特异性的，那么不应该检测到信号，而在野生型（WT）细胞系中则应该检测到特异性靶蛋白的信号。KO细胞系提供了真正意义上的阴性对照，一度被称为“抗体特异性验证的金标准”，以确认抗体对目标蛋白的特异性。

PART.1 隆重推出 KO 系列产品

了解更多KO细胞系、KO裂解液产品请联系Bioss区域销售经理！

KO验证的特异性抗体

Bioss提供热门指标的KO验证抗体列表，验证进程仍在继续：

PART.2 CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

服务编号：SV1501

一、服务内容与流程

服务内容:

 服务流程：

1.客户提供需要敲除的指标信息，与公司商定具体的制备项目、数量和费用，双方签订《委托CRISPR/Cas9基因敲除服务合同》。

2.双方确定合作细节，实验过程中及时反馈实验进程，并按照规定时间完成委托服务。并向客户提供委托产品与实验报告。

二、技术流程

1.RNP转染法

2.质粒转染法

三、案例结果展示

四、服务优势

1.两种敲除方法（质粒法和RNP法）可供客户选择。

2.每个靶标设计多条sgRNA，提供多种敲除策略，最大限度的提高的KO效率，提高蛋白水平的敲除概率。

3.通过Sanger测序后，多种软件分析编辑效率，提高编辑结果的准确性。

4.不同的细胞系具有专属的转染方案，提高靶标编辑的效率。