COVID-19的全球大流行对准确快速的诊断测试提出了迫切的需求。相比于核酸检测,免疫学检测具有成本低廉、简便快捷的特点,更适合现场快检和POCT(point-of-care testing)诊断方式的开发。免疫学方法对新冠病毒SARS-CoV-2检测的特异性和灵敏度基于特异性抗体的制备、优化以及抗体对的配对筛选。众所周知,抗体对由捕获抗体和检测抗体配对组成。性能优秀的抗体对也是开发SARS-CoV-2的快速诊断盒的前提。利用侧向流动免疫分析(LFA)技术,可以高通量筛选抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白(Nucleocapsid Protein, NP)抗体对,是一种高效筛选鉴定SARS-CoV-2抗体对的方法。
近期,化学预印本刊登了一篇由美国全球健康实验室发表的文章:Antibody Screening Results for Anti-Nucleocapsid Antibodies Towards the Development of a SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Antigen Detecting Lateral Flow Assay。测试者将21种不同公司来源的抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗体进行随机组合,配对为673对抗体对,然后分别在捕获能力和检测能力方面进行了测试,目的是找到那些对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的独特表位具有最大亲和力,同时在LFA中表现最佳的抗体对。与传统的抗体筛选方法(如ELISA、生物层干涉法)相比,文章所述的方法不仅用到了实时LFA反应动力学,并且直接在NC膜上进行测试,能对抗体对的表现进行实时、直观的判断。文章确定了几对候选抗体,这些抗体对在对纯化的SARS-CoV-2核衣壳蛋白和COVID-19临床样本的检测中性能突出,适合进一步开发针对SARS-CoV-2的快速诊断盒。
该文第一轮筛选所用的单体核衣壳蛋白由大肠杆菌表达,而之后的三轮筛选所用的核衣壳蛋白由HEK293真核细胞表达,具有完整的糖基化修饰,因此最接近受感染的人类细胞所表达的病毒蛋白。从图中可以看出,在后三轮测试中,不管是用做捕获试剂还是检测试剂,Bioss的几种核衣壳蛋白抗体都表现不俗。尤其在第三轮,TOP5的每一对抗体对中都能找到Bioss抗体的身影。四轮测试后,发现第33对和第70对抗体组合重复出现在多轮筛选的前五名(见图一)。
图一
文章测试筛选了673对抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗体,并进行了综合排名,Bioss的多个抗体产品跻身TOP10(见图二)。未来有希望利用这些排名靠前的候选抗体来开发用于检测SARS-CoV-2的快速诊断试剂盒。
图二
虽然文章筛选的抗体为SARS-CoV-2的研究诊断迈出了坚实的一步,但对于不同的检测平台,仍需要更多的科研工作者进行开发测试。
本次研究中用到的Bioss全部抗体产品
产品名称 Anti-SARS-CoV-2(2019-nCoV)Nucleocapsid |
|||
货号 | 交叉物种 | 亚型 | 克隆号 |
bsm-41411M |
Mouse |
IgG2b |
1C7 |
bsm-41412M |
Mouse | IgG2b | 7A7 |
bsm-41413M | Mouse | IgG2b | 6A8 |
bsm-41414M |
Mouse | IgG2b | 7E1B |
bsm-41415M | Mouse | IgG2b | 14B2D |