知识要点：荧光标记的流式抗体种类繁多，荧光素的激发光谱与发射光谱各异，给抗体选择、荧光搭配等带来了诸多困扰。需要注意：荧光素的激发波长需要与可激发发光的激光器匹配，荧光素的激发光谱峰值尽可能接近仪器激光的激发光波长。此外，荧光素的激发波长必须选用相应波段检测器接收，以达到同时检测的目的。
荧光素的搭配依据
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定：流式细胞仪检测的通道数、需要同时检测的荧光抗体数、厂家抗体的荧光种类及数目。
（2） 需要同时检测的指标数量超过了仪器能力范围：拆开分管标记。如下例，
计划检测5个指标，而流式细胞仪只有4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。如同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
4色以内流式分析荧光素抗体组合
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PerCP |
FITC、PE |
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PE-Cy5 |
FITC、PE |
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PE-Cy5.5 |
FITC、PE、APC |
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PE-Cy7 |
FITC、PE、APC |
6色、8色、10色流式分析荧光素抗体组合
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6色 |
8色 |
10色 |
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FITC或Alexa Fluor 488 |
FITC FITC 或Alexa Fluor 488 |
FITC或Alexa Fluor 488 |
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PE |
PE |
PE |
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PE-Texas Red或PE- Alexa Fluor610 |
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PerCP-Cy5.5 |
PerCP-Cy5.5 |
PerCP-Cy5.5 |
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PE-Cy7 |
PE-Cy7 |
PE-Cy7 |
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APC或Alexa Fluor647 |
APC 或 Alexa Fluor647 |
APC 或 Alexa Fluor647 |
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APC或Alexa Fluor680或Alexa Fluor700 |
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APC-Cy7或APC-H7 |
APC-Cy7或APC-H7 |
APC-Cy7或APC-H7 |
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AmCyan或BD Horizon V500 |
AmCyan或BD Horizon V500 |
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BD Horizon V450 |
BD Horizon V450 |
