免疫印迹试验（western blotting）

    免疫印迹法是一种通过凝胶电泳分离蛋白质并通过电转移把蛋白质转移到吸附膜上。一经蛋白印迹后，即可通过特异性的标记抗体检测到相应蛋白质。
    十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）可用于检测已被SDS化学变性的蛋白。然而，某些特定的抗体不会在一个变性的蛋白质分子上识别其抗原表位，这时需要进行不含SDS的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
    蛋白印迹转膜可以通过湿法或半干法进行。在前者，凝胶夹在印迹膜和各种过滤装置中间，然后把整个装置埋进一个装满Tris转移缓冲的电极槽中。在后者，夹在中间的凝胶周围只有少量的缓冲液，然后封闭在电极板之间。虽然半干法转膜较快，但需要很好地拟合各部分的夹层配件，而湿法转膜很少会出现问题，可以尽量保持重复实验结果的一致性。此外，如果半干法转膜时间过长，较小分子量的蛋白质可能会从膜上转过。
    转膜后，需对膜进行封闭，以减少非特异性蛋白结合，然后进行用一抗孵育膜，以研究感兴趣的目标蛋白。单克隆抗体通常具有更高的特异性；然而许多单克隆抗体产生于某个特定肽段而不是一个天然蛋白质，因此可能无法检测到PAGE所分离的天然蛋白。也可使用多克隆抗体，但易形成较高的背景值。因一抗通常无标记，所以需要一个可以结合在一抗Fc段的标记的二抗，以用于最后的检测。通常会用酶来标记二抗。酶标记后的印迹可通过化学发光酶底物及放射自显影技术成像。被抗体检测和标记到的蛋白质会出现在图像的暗区。
    斑点印迹法类似于免疫印迹法，在膜上检测目标蛋白；但是斑点印迹法中检测的蛋白质不用电泳进行分离。取而代之的是，含有目标蛋白的样品被直接“点”到膜上，这不能做到定量检测，但它可以直接检测某种特定蛋白的有无。例如，斑点印迹法可用于检测蔗糖梯度分离的细胞裂解产物中的某些蛋白质定位。

免疫印迹试验常见的问题及原因

1、没有条带

2、微弱的条带（weak single）

3、额外的条带（Extra Bands）

4、高背景（High Background）

5、 膜上散在不均匀的污点