重组兔单克隆抗体制备 服务编号：SV1600
本服务项目主要是根据客户的要求制备兔单克隆抗体，兔单抗具有高特异性、强亲和力的优点。兔因其免疫系统发育的特殊性，能有效识别在小鼠中免疫原性低的抗原或半抗原。因此，与鼠单抗相比，兔单抗在科研、诊断和医疗多个领域有着更好的表现与广泛的应用，且有更高的亲和力和特异性，可识别更多抗原表位，有更多的候选阳性克隆，更易于人源化特点。
单B细胞抗体开发技术是通过流式分选技术，从免疫动物或康复者外周血中分离抗原特异性B细胞，利用单细胞测序技术从单一B细胞中提取抗体重、轻链基因，并将抗体基因序列插入高表达载体，从而实现抗体的高效开发与表达。该技术获得抗体重、轻链基因天然配对、易于改造，抗体亲和力高。相比传统方法（如杂交瘤技术），单B细胞抗体技术显著缩短了开发周期；能够以较少的细胞量获得更多的特异性单克隆抗体，且阳性克隆数量显著高于传统方法。
噬菌体展示技术(Phage Display)是采用分子克隆技术从脾脏或外周血PMBC中提取抗体重、轻链基因，通过基因工程技术将抗体的重、轻链基因克隆至噬菌粒载体，将抗体基因与噬菌体外壳蛋白（如pIII）融合表达，使抗体展示在噬菌体表面，构建噬菌体文库，然后通过加压筛选获得高亲和力的阳性克隆。噬菌体文库包括包括天然抗体库、免疫抗体库、人工改造的库等，相比传统抗体开发技术，噬菌体展示技术可以针对各种抗原的抗体，包括蛋白质、多肽、细胞表面抗原等筛选和富集数百万个不同的抗体，极大地提高了筛选效率，并且保留了样本中抗体种类的多样性。噬菌体展示技术是一种高效、快速的抗体开发技术，具有高通量、高多样性和易于操作的特点。通过直接展示抗体蛋白在噬菌体表面，该技术能够快速筛选出高特异性和高亲和力的抗体，广泛应用于治疗性抗体开发、诊断试剂制备和基础研究等领域。
Tip: 请您填写项目申请表。以便Bioss为您提供更好的技术服务。
一、 服务流程
1、客户提交重组兔单克隆抗体制备请求并明确对抗体的要求，与公司商定具体的制备项目、数量和费用，双方签订《委托单克隆抗体制备合同》。
2、客户提供抗原或抗原信息，我公司按照合同要求安排重组兔单克隆抗体制备服务，并在规定时间内完成制备委托。
3、抗体制备完成后，我公司按照客户要求纯化分装，免费低温邮寄给客户，同时提供抗体制备报告。
二、 样品要求
1、客户提供制备抗体所需蛋白或多肽片段，抗原纯度＞85%，数量＞10mg，浓度＞1mg/ml。
2、客户提供的抗原信息应包含蛋白抗原的英文全称、种属信息、GeneID或序列信息；化合物抗原应提供化学结构式、活性基团、溶解性等信息。
3、请提前说明样品来源和生物危害等情况，或其他任何特殊情况。
三、兔单克隆抗体收费标准
1、单B细胞平台
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服务项目 |
服务内容 |
周期 |
收费 |
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抗原制备 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶联蛋白10mg（抗原无毒性）， 乙方用于免疫动物和检测 |
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b. 客户提供多肽，博奥森偶联载体蛋白 |
1周 |
询价 |
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c. 原核系统表达蛋白 |
4周 |
询价 |
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d. 设计、合成多肽、偶联载体蛋白（15aa左右） |
2周 |
询价 |
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e. 磷酸化、甲基化修饰多肽、偶联载体蛋白 （包括：设计修饰多肽两条，分别合成及偶联，未修饰多肽一条） |
2周 |
询价 |
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f. 特殊修饰多肽 |
4周 |
询价 |
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动物免疫 血清检测 |
免疫2只新西兰大白兔，免疫3-4次，血清效价采用间接ELISA法， 最终取一只达到效价>1:16000以上，可满足单细胞分选 注：甲、乙双方根据检测结果最终判定是否项目需要继续进行 （结果要及时反馈）；甲方自行选择是否进行内源性验证 |
4-6周 |
询价 |
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B细胞分选与培养 |
选出免疫应答最佳的1只兔子，从脾脏或全血中分离PBMC， 采用IgG阳性和抗原特异性双阳性通过流式细胞术（FACS） 分选记忆性单B细胞至10个96孔细胞培养板培养 |
2周 |
询价 |
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阳性克隆对筛选 及B细胞的测序 |
对经培养的B细胞克隆进行抗原ELISA筛选，阳性B细胞上清供 甲方进行测试，选取10株单克隆进行单B细胞测序， 获取抗体轻重链基因序列。
注：甲方自行选择是否进行内源性验证 |
1-2周 |
询价 |
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阳性克隆抗体的 重组表达 |
将扩增得到的抗体基因插入带有恒定区基因的表达载体中， 然后选择合适的表达系统进行表达， 然后采用Protein A亲和纯化，最终每个兔单抗交付不超过50ug |
4周 |
询价 |
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抗体的扩大培养 与纯化 |
根据客户选定的2-3株克隆，进行扩大培养， 并通过亲和层析等纯化方法提纯抗体
注：甲方自行选择是否进行内源性验证 |
2周 |
询价 |
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产品交付 |
1、2-3个兔单克隆抗体100ug 2、2-3个挑选的兔单抗对应的抗体序列 3、项目报告 |
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bioss
2、 噬菌体展示平台
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服务项目 |
服务内容 |
周期 |
收费 |
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抗原制备 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶联蛋白10mg（抗原无毒性）， 乙方用于免疫动物和检测 |
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b. 客户提供多肽，博奥森偶联载体蛋白 |
1周 |
询价 |
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c. 原核系统表达蛋白 |
4周 |
询价 |
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d. 设计、合成多肽、偶联载体蛋白（15aa左右） |
2周 |
询价 |
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e. 磷酸化、甲基化修饰多肽、偶联载体蛋白 （包括：设计修饰多肽两条，分别合成及偶联，未修饰多肽一条） |
2周 |
询价 |
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f. 特殊修饰多肽 |
4周 |
询价 |
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动物免疫 血清检测 |
免疫2只新西兰大白兔，免疫3-4次，血清效价采用间接ELISA法， 最终取一只达到效价>1:16000以上，可满足继续实验； 注：甲、乙双方根据检测结果最终判定是否项目需要继续进行 （结果要及时反馈） |
8-10周 |
询价 |
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B细胞收集 |
采集外周血，分离PBMC或取脾脏组织，提取总RNA， 采用RT-PCR制备cDNA |
1周 |
询价 |
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噬菌粒的构建 与转化 |
1、噬粒构建与转化：以cDNA为模板、PCR扩增兔轻、 重链可变区基因，兔VH、VL基因拼接噬菌粒载体， 电击转化TG1宿主菌，构建噬菌体文库 2、文库鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率 3、文库phage制备：文库培养扩增+辅助噬菌体侵染包装， 表达成phage库 |
4-5周 |
询价 |
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噬菌体文库筛选 |
1、采用固相筛选等多种方式，进行亲和筛选，筛选高亲和力兔单抗 2、挑取96个克隆培养扩增+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆 3、挑取全部阳性克隆进行基因测序 |
4-5周 |
询价 |
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表达抗体（备选） |
选择真核表达系统进行表达 |
2-4周 |
询价 |
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抗体鉴定（备选） |
对纯化后的抗体进行最终鉴定，ELISA、WB、SPR等 |
1周 |
询价 |
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产品交付 |
1、实验报告，包括流程，检测报告 2、阳性克隆序列 3、阳性菌株 4、噬菌体免疫文库 |
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bioss
